T/NAASS 057—2023 牛4型疱疹病毒间接酶联免疫吸附试验 抗体检测技术规程-团体标准
目录
| 标准详细信息 | |
|---|---|
| 标准状态 | 现行 |
| 标准编号 | T/NAASS 057—2023 |
| 中文标题 | 牛4型疱疹病毒间接酶联免疫吸附试验 抗体检测技术规程 |
| 英文标题 | Technical specification for detection of indirect ELISA antibodies to bovine herpesvirus type 4 |
| 国际标准分类号 | 65.020.30 动物饲养和繁殖 |
| 中国标准分类号 | |
| 国民经济分类 | A031 牲畜饲养 |
| 发布日期 | 2023年03月22日 |
| 实施日期 | 2023年04月25日 |
| 起草人 | 李知新、周海宁、邸静、尹才、封元、赵燕、闫小芹、左新文、常耀祖、吴建宁、张学军、李莉娟、王磊、梁小军、郭亚男、王博、王晓亮。 |
| 起草单位 | ：宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心、宁夏回族自治区畜牧工作站、同心县动物疾病预防控制中心、固原市农产品质量安全监管中心、宁夏农林科学院动物科学研究所。 |
| 范围 | 本文件规定了牛4型疱疹病毒间接酶联免疫吸附试验抗体检测的术语和定义、间接酶联免疫吸附试验。 本文件适用于牛血清、牛血浆、牛奶样本中牛4型疱疹病毒病抗体的检测，可用于该病的实验室检测、诊断和流行病学调查。 |
| 主要技术内容 | 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 牛4型疱疹病毒Bovine herpesvirus 4，BoHV-4 牛4型疱疹病毒属于疱疹病毒科丙型疱疹病毒亚科猴病毒属，是导致牛生殖障碍的主要病毒之一。 间接酶联免疫吸附试验Indirect enzyme linked immunosorbent assay, iELISA 间接ELISA方法是先将抗原结合到ELISA板上，随后分两步进行检测，首先加入检测抗体与抗原特异性结合，随后加入酶标二抗检测并利用底物显色,由呈色反应来测定抗原。 4 间接酶联免疫吸附试验操作 试验准备 实验环境、仪器与设备、洗液的制备、稀释液的制备、示踪剂工作液的配制按照试剂盒说明书规定执行。实验环境的生物安全条件应符合GB/T 19489的要求，稀释用蒸馏水应符合GB/T 6682的要求。 检测样品 新鲜或冷冻的血清、血浆、奶样均可直接用于检测。 奶样准备：4000rpm/min离心20 min，利用巴斯德吸管吸取中间层液体，注意不要接触到下层的细胞沉淀物。未稀释的脱脂奶可直接加入微孔板。 操作程序 使用前将所有试剂恢复至21 ℃±3 ℃，轻轻摇动或旋转，使试剂混合均匀。 4.3.1 准备 取出微孔板，并在操作记录表上标记样品的位置。如果使用微孔板的一部分，则只需取出足够检测样品的条数。未使用的微孔板条用锡箔纸包好，保持干燥与密封，2 ℃～8 ℃保存。 4.3.2 血清或血浆稀释 血清或血浆按试剂盒要求稀释，避免使用溶血样品和具有凝结物的样品。在试剂盒的微孔板中按要求加入样品、稀释液，吹打混匀。 4.3.3 对照样品（阳性血清和阴性血清）和示踪剂稀释 阳性血清、阴性血清及示踪剂应用稀释液按试剂盒要求进行稀释。 4.3.4 加样 每孔加入样品（血清、血浆或奶样），一孔一样。阳性血清加入A1孔，阴性血清加入A2孔，示踪剂加入A3孔，样品1加入A4孔，以此类推。 4.3.5 感作 将微孔板封板后，按照试剂盒说明书中指定的时间进行室温孵育。 4.3.6 洗涤 弃去微孔板中液体，用300 μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在洗涤时以及在加入下一步试剂之前要防止反应板出现干燥现象，避免孔内产生气泡，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液体。 4.3.7 稀释酶结合物 将酶结合物用稀释液按要求进行稀释。 4.3.8 加酶结合物 每孔加入酶结合物，摇匀。将微孔板封板后，按照试剂盒说明书中指定的时间进行室温孵育，按步骤4.3.6进行洗涤。 4.3.9 加底物 每孔加入底物溶液。按照试剂盒说明书中指定的时间进行室温孵育。 4.3.10 加终止液 每孔加终止液终止反应。 4.3.11 测定吸光值（OD值） 酶标仪预热15 min，在加入终止液5 min内读取试剂盒说明书中指定波长的吸光度值。 实验有效性检测 只有当满足试剂盒说明书规定的条件时检测才有效。 结果计算 使用试剂盒说明书指定的计算公式进行结果计算。 结果判定 使用试剂盒说明书规定的判定标准进行结果判定。 |
| 是否包含专利信息 | 否 |
| 标准文本 | 查看 |
| 团体详细信息 | |||
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| 团体名称 | 宁夏回族自治区农学会 | ||
| 登记证号 | 51640000MJX153778E | 发证机关 | 宁夏回族自治区民政厅 |
| 业务范围 | 理论、政策研究，学术经验交流，人才培训，技术咨询。 | ||
| 法定代表人/负责人 | 虞景龙 | ||
| 依托单位名称 | 宁夏回族自治区农业农村厅 | ||
| 通讯地址 | 宁夏回族自治区银川市金凤区北京中路159号 | 邮编 : 750002 | |