T_CGTA 11—2025 大豆转基因成分的快速检测 环介导等温扩增（LAMP）检测法-团体标准
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| 标准详细信息 | |
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| 标准状态 | 现行 |
| 标准编号 | T/CGTA 11—2025 |
| 中文标题 | 大豆转基因成分的快速检测 环介导等温扩增（LAMP）检测法 |
| 英文标题 | Rapid detection for genetically modified components in soybeans ——Loop-mediated isothermal amplification detection method |
| 国际标准分类号 | 67.020 |
| 中国标准分类号 | X11 |
| 国民经济分类 | M731 自然科学研究和试验发展 |
| 发布日期 | 2025年08月01日 |
| 实施日期 | 2025年08月01日 |
| 起草人 | 马增彬、钱承敬、仉磊、刘晓萌、王健、李俊、于旭德、韩冀、杨若松、龚雅云。 |
| 起草单位 | 百沃特（天津）生物技术有限公司、中粮营养健康研究院有限公司、北大荒粮食集团有限公司、黑龙江象屿农业物产有限公司、通标标准技术服务（青岛）有限公司。 |
| 范围 | 本文件规定了大豆中转基因成分环介导等温扩增快速检测方法的术语和定义、原理、仪器与设备、试剂与材料、样品制备、检测方法和判定规则的要求。 本文件适用于大豆中转基因成分CP4-EPSPS、G2-EPSPS和G10evo-EPSPS核酸序列的快速检测。 |
| 主要技术内容 | 6.1试剂 除另有说明外，所有试剂均为分析纯或生化试剂，实验室用水应符合GB/T 6682中的一级水的要求。 6.1.1 1 M Tris-HCl（pH 8.0）。 6.1.2 0.5 M EDTA（乙二胺四乙酸二钠，pH 8.0）。 6.1.3 NaCl（氯化钠）。 6.1.4 CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）。 6.1.5 1 M HCl（盐酸）。 6.1.6 10 M NaOH（氢氧化钠）。 6.1.7 dNTPs溶液：每种核苷酸浓度10 mmol/L。 6.1.8 Bst DNA聚合酶大片段（如：NEB公司或具有同等效果的DNA聚合酶）：酶浓度8 U/μL。 6.1.9 10×ThermoPol Reaction Buffer：含200 mmol/L Tris-HCl（pH 8.8）、100 mmol/L KCl、100 mmol/L (NH4)2SO4、20 mmol/L MgSO4、1% Trition X-100。 6.1.10 MgSO4溶液：150 mmol/L。 6.1.11 甜菜碱溶液：5 mol/L。 6.1.12 酚红溶液：10%。 6.1.13 引物：内源基因、CP4-EPSPS、G2-EPSPS和G10evo-EPSPS环介导等温扩增（LAMP）检测方法作用引物见表1。 6.2 溶液配制 6.2.1 裂解液：量取10 mL 1 M Tris-HCl（pH 8.0）（6.1.1）、0.8 mL 0.5M EDTA（pH 8.0）（6.1.2），称取81.86 g NaCl（6.1.3）、2 g CTAB（6.1.4）加入烧杯中，加入约800 mL水，搅拌溶解。用盐酸（6.1.5）或NaOH（6.1.6）调节pH至8.0，加水定容至1 L，混匀。 6.2.2 复溶液：量取10 mL 10 M Tris-HCl（pH 8.0）（6.1.2）、2 mL 0.5M EDTA（pH 8.0）（6.1.3），加入烧杯中，加入800 mL水，搅拌混匀。用盐酸（6.1.5）或NaOH（6.1.6）调节pH至8.0，加水定容至1 L，混匀。 6.2.3 扩增反应液：内源基因、CP4-EPSPS、G2-EPSPS和G10evo-EPSPS环介导等温扩增（LAMP）反应液配制见表2。分别配制各检测基因扩增反应液后按照25 μl/管分装至0.2 mL离心管中，-80 ℃快速冷冻30 min，预冷冻后的试剂转移至冻干机-40 ℃保持2 h，启动真空泵将压力降至0.1 mBar以下，缓慢升温（0.5 ℃/min）至-20 ℃，使冰晶逐渐升华。再将温度（0.2 ℃/min）逐渐升至20 ℃，保持真空状态2 h后关闭真空泵，充入惰性气体恢复常压。取出冻干后的试剂，盖上离心管盖。 7 样品制备 7.1 抽样和制样 粮食样品扦样采样操作按照GB/T 5491进行，采集样品的制备按照GB/T 19495.7进行。 7.2 样品前处理 7.2.1 裂解：取0.20 g±0.05 g籽粒粉末于5 mL离心管中，加4 mL裂解液（6.2.1），上下颠倒混匀（或涡旋混匀30 s），此为样品裂解液。 7.2.2 复溶：取25 μL样品裂解液（7.2.1）加入一个新的1.5 mL的离心管中，再向离心管中加入1 mL复溶液（6.2.2），上下颠倒混匀（或涡旋混匀30 s），备用。此为样品复溶液。 8 样品测定 8.1 试液配制 更换移液器吸头，取25 μL样品复溶液（7.2.2）加入提前准备好扩增反应液（6.2.3）的冻干管中，换4联管盖，盖紧管盖后上下颠倒混匀（或涡旋混匀30 s），用手将液体甩至管底（注意液体不要有气泡）。 8.2 核酸扩增 将试液（8.1）置于65 ℃水浴锅（5.1）中恒温扩增30 min，反应结束。 8.3 结果判定 8.3.1 质量控制 内源基因检测试剂应为黄色或橘黄色，如不符合应重新进行试验。 8.3.2 结果判断 内源基因检测试剂为黄色或橘黄色，外源基因检测试剂为红色时，判定该样品不含所检基因，可表述为“未检出×××基因”。 内源基因检测试剂为黄色或橘黄色，外源基因检测试剂为黄色或橘黄色时，判定该样品含有所检基因，应按照GB/T 19495.4标准确证实验结果，再根据确证结果判断和表述。 |
| 是否包含专利信息 | 否 |
| 标准文本 | 查看 |
| 团体详细信息 | |||
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| 团体名称 | 中国粮食商业协会 | ||
| 登记证号 | 511000005000158151 | 发证机关 | 中华人民共和国民政部 |
| 业务范围 | 行业自律，信息交流，业务培训，国际合作，咨询服务。 | ||
| 法定代表人/负责人 | 孙豹 | ||
| 依托单位名称 | 中粮贸易有限公司 | ||
| 通讯地址 | 北京市东城区建国门内大街8号中粮广场A座8层 | 邮编 : 100000 | |