T_DALN 039—2025 牛病毒性腹泻、粘膜病诊断技术规程-团体标准
目录
| 标准详细信息 | |
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| 标准状态 | 现行 |
| 标准编号 | T/DALN 039—2025 |
| 中文标题 | 牛病毒性腹泻、粘膜病诊断技术规程 |
| 英文标题 | |
| 国际标准分类号 | 01.020 |
| 中国标准分类号 | |
| 国民经济分类 | A031 牲畜饲养 |
| 发布日期 | 2025年05月16日 |
| 实施日期 | 2025年05月31日 |
| 起草人 | 佟艳、李润国、朱旻鹏、林广宇 白春生、唐莹、都书德、刘文庆、高忠梅、白子金、高林、杜宏伟、郑晓明、王琳财、尹明、陈贺、王云、王彦军 |
| 起草单位 | 辽宁省奶业协会、辽宁奉牧联合奶业有限公司、锦州益多乐乳业有限公司、大连三寰乳业有限公司、大连心乐乳业有限公司、鞍钢实业集团乳业有限公司、丹东升泰乳业有限公司、铁岭市大牛乳品有限公司、本溪木兰花乳业有限责任公司、辽宁澳珍乳业有限公司、盘锦澳特宝食品有限公司 |
| 范围 | |
| 主要技术内容 | 3.1 牛病毒性腹泻-黏膜病 牛病毒性腹泻-黏膜病（BVD-MD）发病率高，是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的主要发生于牛的一种急性、热性传染病，具有一定的致死率，且存在持续感染、免疫抑制的情况，对养牛产业造成了较大的危害。 3.2 牛病毒性腹泻-黏膜病临床症状 BVD-MD的主要临床症状表现为腹泻、高热、黏膜溃疡，消化道呈线性病变，伴随精神不振、厌食、呼吸系统疾病、消化系统疾病，严重者出现血便等，潜伏期一般为5～7d。可分为3个类型，急性型、持续感染型（PI）和黏膜病（MD）。 4 原理 4.1 竞争法荧光抗体检测 利用荧光素标记抗体，使之在涂片上或组织切片上与标本中的待测抗原特异性地结合，采用高发光效率的点光源，透过滤色板发出一定波长的光，使结合在标本上的荧光素被激发而产生荧光，借助荧光显微镜观察底物片上荧光染色形态，可以判断有无待测抗原或抗体。 4.2免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA） 免疫过氧化物酶单层细胞试验，其主要原理是通过抗原抗体的相互作用，产生特异性显色反应，通过光学显微镜肉眼即可观察并判定结果 4.3微量血清中和试验 动物受到病毒感染后，体内产生特异性中和抗体，并与相应的病毒粒子呈现特异性结合，因而阻止病毒对敏感细胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。中和试验是以测定病毒的感染力为基础，以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据，来判定免疫血清中和病毒的能力。 4.4 抗原捕获酶联免疫吸附试验（RT-PCR） RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。 5 临床诊断 5.1持续感染型（PI） 慢性病例临床症状不明显或逐渐发病，生长发育受阻，消瘦,体重逐渐下降，PI牛大多数表面健康，但其终生带毒排毒，且在其体内检测不到抗体，是牛场净化BVDV最大的阻碍。 5.2急性型 牛一般为突然发病,体温升高、发热,血液中白细胞减少,精神沉郁,眼睛和鼻腔有液体分泌物流出,口腔和鼻镜黏膜溃烂,严重腹泻,便血,整个消化道出现糜烂性或溃疡性病灶,通常于发病后1～2周急性死亡,康复的病例较少。 5.3黏膜病（MD） 黏膜病是牛感染BVDV最为严重的类型，死亡率极高，几乎达到100%，黏膜病（MD）类型初期不表现临床症状，在表现临床症状后1周左右死亡。 5.4急性BVDV感染 导致消化道和呼吸道表皮损伤。严重急性感染病牛剖检可见动物胃肠道黏膜溃疡、糜烂。 6临床诊断判定标准 出现5.2或5.3或5.4至少一项临床症状且同时出现5.3解剖病理变化可判定为BVD/MD可疑，需结合其他诊断方法进一步确诊 7 实验室诊断 7.1 竞争法荧光抗体试验 所需器材、试剂、试验样品、操作方法应符合JIS K0461相关要求 7.2免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA） 所需器材、试剂、试验样品、操作方法应符合SN/T1247.2相关要求。 7.3 微量血清中和试验 所需器材、试剂、试验样品、操作方法应符合NY/T54要求。 7.4 抗原捕获梅 所需器材、试剂、试验样品、操作方法应符合GB/T5009相关要求。 8实验室诊断判定标准 8.1竞争法荧光抗体试验 细胞在荧光显微镜下可视黄绿色荧光的细小颗粒散布于细胞浆内可判定为阳性，而阴性对照孔细胞无荧光；如果阳性对照、阴性对照不成立,则试验无效,重新检测。 8.2 免疫过氧化物酶单层细胞试验 细胞在显微镜下出现弥漫状或团块状棕红色可判定为阳性,而阴性对照孔的细胞无棕红色；如果阳性对照、阴性对照不成立,则试验无效,重新检测。 8.3 微量血清中和试验 在定性试验中,被检血清在1：5稀释度有2个或2个以上孔的细胞完全被保护,该血清即为阳性；在双份血清测定中,当间隔21d的第二份来源于同一动物的血清中和效价高于第一份血清中和效价两个或两个以上滴度,则证明该动物正在发病过程中。 8.4抗原捕获酶联免疫吸附试验（ELISA） 样品判为牛病毒性腹泻/黏膜病阴性的标准是S/P值<0.20;阳性标准是S/P值≥0.30；当S/P值介于0.20和0.30之间,样品判为牛病毒性腹泻/黏膜病可疑,应重新检测。 8.5反转录聚合酶链反应(RT-PCR) 如被检样品有条带,大小与阳性样品相同为244 bp,即可判定为阳性 |
| 是否包含专利信息 | 否 |
| 标准文本 | 不公开 |
| 团体详细信息 | |||
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| 团体名称 | 辽宁省奶业协会 | ||
| 登记证号 | 51210000507410594H | 发证机关 | 辽宁省民政厅 |
| 业务范围 | 开展理论研究，经验交流，新技术推广，技术咨询，业务培训等活动 | ||
| 法定代表人/负责人 | 徐永革 | ||
| 依托单位名称 | |||
| 通讯地址 | 沈阳市和平区十纬路18号 | 邮编 : 110001 | |