T_DALN 042—2025 奶牛隐性乳房炎抗性分子标记检测技术规程-团体标准
目录
| 标准详细信息 | |
|---|---|
| 标准状态 | 现行 |
| 标准编号 | T/DALN 042—2025 |
| 中文标题 | 奶牛隐性乳房炎抗性分子标记检测技术规程 |
| 英文标题 | |
| 国际标准分类号 | 01.020 |
| 中国标准分类号 | |
| 国民经济分类 | A031 牲畜饲养 |
| 发布日期 | 2025年06月05日 |
| 实施日期 | 2025年06月20日 |
| 起草人 | 徐环宇、佟艳、高忠梅、高林、周丛 |
| 起草单位 | 辽宁省奶业协会、辽宁奉牧联合奶业有限公司、沈阳原著生物有限公司、沈阳农业大学、辽宁任洽检测有限公司 |
| 范围 | |
| 主要技术内容 | 本文件规定了奶牛隐性乳房炎抗性分子标记检测的术语与定义及血液基因组DNA提取、基于KASP技术的PCR扩增、结果与分型等。适用于奶牛隐性乳房炎抗性分子标记检测。 3.1 生产性能测定 奶牛亚临床乳房炎，又称隐性乳房炎，亚临床乳房炎主要特征是奶牛的乳房和乳汁异常变化，通常通过实验室方法检测到牛奶中炎症细胞（体细胞）的增加，乳汁中体细胞数超过50万/mL，则被确定为患有奶牛隐性乳房炎，其乳汁较健康奶牛的有显著差异，pH值、氯化钠、电导值等理化细菌数量远远高于正常乳汁。 3.2 KASP高通量分型技术 竞争性等位基因特异PCR利用一种独特形式的竞争性等位基因特异性聚合酶链式反应，通过荧光报告系统，从核酸水平上识别和测量发生的遗传变异，进而检测单核昔酸多态性(SNPs)的插入或缺失 (Indels)。 4 检测牛群样品采集 4.1 通过尾静脉采血，采集血液 5mL，使用 EDTA 溶液抗凝 5 血液基因组DNA提取 5.1 参照血液基因组DNA提取试剂盒说明书提取基因组DNA 5.2 用紫外分光光度计和 2%琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 的浓度和质量。 6 基于KASP技术的PCR扩增 6.1 PCR扩增体系 (10 L): KASP 2×Master Mix 4μ L、DNA样品 1μ L、2个正向引物均为0.15μ L、反向引物 0.4μ L，加dd H2O补至8μ L。阴性对照反应中以等量 dd H20代替 DNA 样品。(见附表1)。 6.2 KASP 分子标记检测引物，见附表2 6.3 PCR扩增反应条件(见附表 3)。PCR 扩增循环结束后，在室温下，利用酶标仪读取荧光值。 7 结果与分型 利用LC480Software v1.5.1 软件分析分型结果，用LGC公司SNP View软件展示。标记为黄色的基因型样品为HEX 标记的等位基因是纯合的，标记为红色的基因型样品为FAM标记的等位基因是纯合的，标记为绿色的样品为杂合。 |
| 是否包含专利信息 | 否 |
| 标准文本 | 不公开 |
| 团体详细信息 | |||
|---|---|---|---|
| 团体名称 | 辽宁省奶业协会 | ||
| 登记证号 | 51210000507410594H | 发证机关 | 辽宁省民政厅 |
| 业务范围 | 开展理论研究，经验交流，新技术推广，技术咨询，业务培训等活动 | ||
| 法定代表人/负责人 | 徐永革 | ||
| 依托单位名称 | |||
| 通讯地址 | 沈阳市和平区十纬路18号 | 邮编 : 110001 | |